Lonza (Amaxa) 4D-Nucleofector LV 大規(guī)模流式電穿孔細胞核轉染系統

——用于懸浮/貼壁哺乳動物真核細胞的大容量核酸轉染儀

 

Lonza 4D-Nucleofector LV 大規(guī)模流式電穿孔細胞核轉染系統（4D-Nucleofector LV Unit，簡稱LV模塊，或LV單元），是在傳統電穿孔技術的基礎上，針對每一種細胞，優(yōu)化電脈沖參數、轉染液，使細胞轉染效率、細胞活率得到顯著提升，解決了原代細胞、干細胞、T細胞等使用傳統電穿孔轉染效率低下的問題。

4D-Nucleofector核轉技術（原德國Amaxa Nucleofection核轉染技術）對質粒DNA轉染效率高達90％，寡核苷酸（如siRNA）轉染效率高達99％，面世20年來，已成功轉染＞1200種細胞系、＞130種原代細胞，并在干細胞、免疫細胞、神經細胞等各類較難轉染的細胞、以及外泌體電穿孔載藥獲得了優(yōu)秀的轉染效果。

同時，4D-Nucleofector核轉染可讓外源基因直接穿過核膜進入細胞核，不依賴細胞有絲，實現2小時快速表達。Lonza 4D-Nucleofector LV模塊可提供單次最高2×10^9個細胞、封閉、無菌的高效轉染，在人T細胞、CHO懸浮細胞、HEK23懸浮細胞、K562細胞等超過700種細胞中大量應用。

Lonza全球共享數據庫，包含超過1500種原代細胞、細胞系的轉染數據，提供包括細胞來源、傳代、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基、到轉染后培養(yǎng)技巧的成熟流程，讓研究者在海量數據支持中快速開展實驗，并取得成功。操作4D-Nucleofector核轉染設備時，只需一鍵調用Lonza內置的轉染程序，即可實現細胞快速、高效轉染，而無需自行摸索轉染條件。



 

4D-Nucleofector核轉染技術優(yōu)勢

-采用高分子聚合物電極，避免傳統鋁電極的離子毒害，維持細胞生理狀態(tài)，提高存活率。
-轉染后可快速觀察實驗結果，例如轉染GFP后最快2小時可觀察到蛋白。
-無需自己優(yōu)化條件，擁有超過759種細胞類型的現成程序，可直接使用，全球共享數據庫，超過1500條轉染數據可供參考。
-可轉染包括DNA、mRNA、miRNA、siRNA、肽、蛋白質、小分子化合物在內的多種底物。
-可用于難以轉染的原代細胞、干細胞、神經元、細胞系，以及外泌體
-靈活的轉染規(guī)�？s放，可在低、中、高通量中輕松轉移，實現2×10^4至1×10^9個細胞數量的輕松擴展。
-全球發(fā)表文章超過14,000篇。

 

 


Lonza 4D-Nucleofector LV大規(guī)模細胞核轉染儀，細胞治療基礎研究高效電轉染系統


1、封閉、無菌的系統和耗材設計，滿足細胞治療基礎研究的需求。


 

 

 

2、20mL大容量，LV核轉儀提供單次1mL（最多1×10^8個細胞）的手動加樣、20×1mL（最多2×10^9個細胞）的自動加樣，快速高效。


 

 

 

3、符合cGMP要求，可使用符合美國FDA21 CFR part 11、歐盟Annex 11的軟件進行控制，適用于嚴格監(jiān)管的GMP實驗室。

①用戶管理（登陸，不同級別）
②具有用戶姓名與時間標記的電子簽名
③任何記錄的修改或是數據的創(chuàng)建均被記錄在案
④結果報告：失敗報告，以及詳細的問題描述
⑤可根據21CFR part11的要求導出數據（加密，預防）
⑥審計追蹤（使用記錄、更改記錄）
⑦無數據刪除可能

 

 

 

4、規(guī)模可簡單放大，在4D-Nucleofector X模塊（4D-Nucleofector X Unit，簡稱X模塊，或X單元）上進行的2×10^4細胞數量的優(yōu)化轉染方案，可直接在LV模塊上使用。


 

 

實驗數據：分別用4D-Nucleofector細胞核轉儀X模塊（100μL）、LV模塊（1mL）向包括人T細胞、PBMC、293細胞、CHO細胞在內多種代表性細胞中轉染pmaxGFP載體，實現轉染規(guī)模的線性放大。




 

 

 

Lonza 4D-Nucleofector LV大規(guī)模流式核轉染系統，基因治療研究的不二工具。

1、作為非病毒轉染技術，適用于不同的基因編輯系統，如鋅指核酸酶(ZFN)、轉錄激活因子樣效應物核酸酶（TALEN）、CRISPR/Cas9基因編輯系統。
2、可轉染多種不同的底物，如DNA、mRNA、蛋白（如Cas9 RNP），由于轉染條件相同，可進行不同底物的簡單共轉染。
3、常用于應用iPS、CD34+造血干細胞、T細胞的穩(wěn)定修飾。
4、技術成熟可靠，有≥80本相關出版物刊載，眾多領域的知名學者正在使用4D-Nucleofector技術，全球發(fā)表文章超過14,000篇，并持續(xù)不斷增加中！

Lonza 4D-Nucleofector大規(guī)模流式核轉染系統，作為轉染人原代T細胞的強大方法，與CRISPR和其他基因編輯技術的聯合應用，已成為基因治療基礎研究的理想工具。

 



 

4D-Nucleofector LV核轉儀參數

注：常用模塊組合參考：C+X+LV，X模塊用于小規(guī)模優(yōu)化轉染條件，LV模塊用于大規(guī)模轉染。

 

 


 

參考文獻

1.Closed-system transposon-mediated manufacture of GMP grade CAR T-cells via the Lonza Nucleofector LV XL.  LM Brownrigg,et al. ELSERIER(2020)
2.Biomimetic mineralized collagen scaffolds and their effect on osteogenic differentiation. L Luo,et al. ELSERIER(2020)
3.Optimization of clarification process for viral vectors. B Raghavan,et al. ELSERIER(2020)
4.Generation and testing of clinical-grade exosomes for pancreatic cancer. Mayela Mendt,et al. JCI Insight(2018)
5.Off the shelf T cell therapies for hematologic malignancies. BJ McCreedy,et al. ELSERIER(2018)
6.Unlocking the Potential of CRISPR-Based Gene Editing. Andrea Toell. Genetic Engineering & Biotechnology News(2017)


 

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