如細胞培養(yǎng)體系中存在支原體污染,可能造成細胞生長緩慢、染色體異常、代謝異常、轉染效率低、病毒包裝效率低、細胞死亡等。造成實驗重復性低、結果不可信。由于支原體大小為0.1-0.3μm,無法通過過濾去除,無細胞壁結構,普通抗生素如青霉素等也無效,造成研究者細胞損失。
北京澤平代理的Lonza支原體系列產品,提供從支原體檢測、支原體清除、到支原體預防的全套試劑和配套檢測儀器,輕松解決各類支原體污染問題。
一、Lonza支原體檢測試劑盒
Lonza MycoAlert支原體檢測試劑盒(MycoAlert PLUS Mycoplasma Detection Kit),可在20分鐘內快速檢測細胞培養(yǎng)物是否存在支原體污染。其利用了180多種支原體中廣泛存在的支原體酶(在脲原體屬、細菌、酵母中少見),當活支原體被MycoAlert試劑裂解后,支原體酶釋放到培養(yǎng)液中,并與MycoAlert底物特異性反應,催化ADP轉化為ATP,ATP與熒光素酶發(fā)生反應產生光信號,通過檢測底物加入前后讀數(shù)的比值,可判斷樣本中是否含有支原體。
①酶學檢測,操作簡單,20分鐘出結果,輕松量化陰性、陽性;
②覆蓋范圍廣,可檢測44種支原體,包含細胞培養(yǎng)中最常見的6種支原體(口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾原體、發(fā)酵支原體、唾液支原體,占支原體污染的95%)
支原體檢測流程
1、取2mL培養(yǎng)基上清(建議培養(yǎng)48小時以上),200g離心5分鐘,去除細胞和細胞碎片;
2、取100μL上清,加入100μL裂解試劑(MycoAlert PLUS Reagent,含裂解試劑、熒光素酶、熒光素),裂解支原體;
3、室溫22℃(不超過25℃)孵育5分鐘,檢測背景ATP,測量發(fā)光值得到讀數(shù)A;
4、加入100μL支原體酶特異性底物(MycoAlert PLUS Substrate);
5、室溫孵育10分鐘,測量發(fā)光值得到讀數(shù)B,計算B/A比值。
結果解讀
所用試劑盒 |
支原體陰性 |
結果可疑,需要繼續(xù)培養(yǎng)24小時后復檢 |
支原體陽性 |
MycoAlert |
<0.9 |
0.9-1.2 |
>1.2 |
MycoAlert PLUS |
<1.0 |
1.0-1.2 |
>1.2 |
二、支原體檢測儀器
1、Lonza專用單孔生物發(fā)光檢測儀器Lucetta 2
①小型便攜式管式光度計,一鍵式檢測,不需要復雜的軟件設置;
②應用廣泛,兩種基本檢測模式,高靈敏度和線性度,最多可儲存2000個單一樣本讀數(shù);
③無特殊耗材,只需要無菌1.5mL離心管即可檢測。
2、多孔單功能發(fā)光檢測儀或多功能酶標儀
如使用多功能酶標儀檢測,要選擇Luminescence檢測功能,不需要設置濾光片;如果使用多孔板檢測,要用不透明的白板或黑板。
三、Lonza支原體清除試劑盒
當發(fā)現(xiàn)存在支原體污染,但樣品格外難得不可丟棄時,Lonza MycoZap支原體去除試劑,可在4天內清除支原體,拯救珍貴的細胞樣品。MycoZap支原體去除試劑,結合抗生素和抗代謝試劑,確保徹底清除支原體。在隨后的4-6周內,可以使用Lonza MycoAlert支原體檢測試劑盒進行不間斷檢測,以保證后續(xù)培養(yǎng)物不被污染。
①使用范圍廣,可徹底清除支原體、無膽甾原體、植物花螺原體等柔膜菌綱物種;
②使用簡單,只需將支原體清除試劑加入培養(yǎng)基中;
③細胞毒性小,不影響細胞正常培養(yǎng)。
四、Lonza支原體預防試劑盒
Lonza MycoZap支原體預防試劑(MycoZap Prophylactic),是一種特異性預防支原體污染的抗生素,其中MycoZap Plus可預防包括支原體、革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌、酵母在內的多種微生物污染,其配方根據細胞系、原代細胞進行了特殊優(yōu)化。
試劑類型 |
預防支原體 |
預防革蘭氏陽性菌/陰性菌,真菌,酵母 |
適用細胞類型 |
MycoZap Prophylactic |
是 |
否(需要與其他抗生素聯(lián)合使用) |
原代細胞/細胞系 |
MycoZap Plus-CL |
是 |
是 |
細胞系 |
MycoZap Plus-PR |
是 |
是 |
原代細胞/細胞系 |
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